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多聚酶链式反应扩增DNA片段

更新时间:2016/8/23 13:56:00  手机版

  多聚酶链式反应扩增DNA片段:

  1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4中游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

  2、PCR反应过程是:变性→复性→延伸

  3、结果:上述三步反应完成后,一个DNA分子就变成了两个DNA分子,随着重复次数的增多,DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。

  细胞被DNA复制与PCR技术的比较:

  知识点拨:

  1、DNA分子复制的人工控制

  解开螺旋:在80~100℃时,DNA双螺旋打开,形成两条DNA单链,称为变性。

  恢复螺旋:在50~60℃左右时,两条DNA单链重新形成双螺旋结构,称为复性。

  复制条件:缓冲液,DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。

  控制仪器:PCR仪(温度周期性自动调节仪)。

  2、PCR的含义是多聚酶链式反应。

  3、PCR技术反应的条件:①稳定的缓冲溶液环境;②DNA模板;③合成引物;④四种脱氧核甘酸;⑤DNA聚合酶;⑥温控设备

  4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。

  5、TaqDNA聚合酶的特点是:耐高温。

  知识拓展:

  1、DNA含量的测定——分光光度法

  2、DNA聚合酶不恩能够从头合成DNA,只能从DNA的3'端开始延伸DNA链,因此DNA复制需要引物。

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